Cosa fare se il pad campione non assorbe il campione?
- I materiali idrofobici possono impedire una diffusione uniforme del campione. Aggiungere un tensioattivo adeguato al buffer di trattamento per migliorare la bagnabilità.
- BSA eccessiva o fissata può rallentare il flusso. Rivalutare il livello di BSA e combinarlo con Tween-20 o additivi simili.
- Dopo il pretrattamento, i pad campione devono essere completamente asciutti e conservati con umidità controllata per ridurre la variabilità tra lotti.
Cosa fare se il pad coniugato non rilascia?
- Particelle di oro colloidale irregolari o aggregate possono creare coniugato inattivo. Iniziare controllando la qualità del sol d'oro e la stabilità dell'accoppiamento.
- Il buffer di rilascio deve bilanciare tensioattivi, protettori proteici e zuccheri per supportare la reidratazione del coniugato e ridurre l'adsorbimento sulla fibra di vetro.
- La spruzzatura dello zucchero e i parametri di essiccazione devono essere stabili per evitare adsorbimento elettrostatico e rilascio incompleto.
Come risolvere falsi positivi, fondo elevato o perdita di sensibilità?
- Verificare che il blocking del coniugato d'oro sia sufficiente, la concentrazione anticorpale adeguata e pH/sali del buffer appropriati.
- Per un fondo elevato sulla membrana, valutare insieme volume dispensato, sistema di blocking, interferenze della matrice e velocità cromatografica.
- La perdita di sensibilità è spesso legata a umidità, sigillatura della busta in alluminio, stato del disidratante e temperatura di conservazione; si raccomandano test di stabilità accelerata.
Perché la striscia diventa viola o grigia durante l'essiccazione?
- Il cambiamento di colore indica spesso aggregazione dell'oro colloidale o perdita di attività. Controllare prima temperatura, umidità e tempo di essiccazione.
- Un'eccessiva essiccazione può danneggiare la conformazione proteica, mentre un'essiccazione insufficiente compromette la stabilità a lungo termine. È essenziale una finestra di essiccazione ripetibile.
- Utilizzare matrici pilota per validare combinazioni di temperatura e umidità, quindi confermare con dati di flusso, fondo e stabilità.
Safheal riassume problemi comuni nella produzione di strisce a flusso laterale con oro colloidale, inclusi pad campione, rilascio del coniugato, falsi positivi, sensibilità e stabilità di essiccazione.